9。準備兩個含氯黴素（20μg/mL） 和四環素（ 10μg/mL）的LB瓊脂平板。-塊平板鋪5μL轉化的BAC細胞，另一塊平板鋪100μL轉化的BAC細胞。30C培養過夜。BAC-pSV1。RecA電轉感受態細胞的製備

10。從步驟9中的一塊低密度篩選平板上挑取一個單菌落，接種到5mL含氯黴素和四環素的LB培養基中。30C，300r/min 振盪培養過夜。

11。 轉移1mL或2mL過夜培養物到-一個250mL Cormning離心管中，此離心管中含有50mL新增氣黴素和四環素的LB培養基。30‘C劇烈振盪生長細胞4~5h，使0D000達到0。6~0。8

12。轉移細胞到50mL Falcon管中。用J6-MI Beckman-Coulter離心機，2560g， 4C離心10min收集細胞。

13。 丟棄上清液，用等體積的冷的高壓滅菌過的10%甘油重懸沉澱。用J6-MIBeckman-Coulter離心機，2560g， 4’C 離心10min。此步驟重複1次。

14。儘可能地將上清液倒出，用終體積為200uL的冷的10% （VD）甘油水溶液輕輕重懸細胞。將電轉感受態細胞分裝為40μL等份到無菌管中。-80C 儲存pSV1。RecA 轉化的BAC感受態細胞。

RecA有利於報道載體和BAC的重組，進而產生修飾的BAC透過氯黴素、氨苄青黴素和四環素中生長篩選重組體。只有含有正確修飾BAC和pSV1。RecA複製的細菌被篩選出來。