G418溶液（geneticin，20mgml）G418溶液（geneticin
，
20mg/ml）
產品貨號
：
R21755
產品規格：
10ml/50ml
產品簡介：
新黴素
（geneticin， G418）
又稱遺傳黴素，是一種氨基糖苷類抗生素
，
是最常用的細胞穩定轉染抗性篩選試劑。
G418
能阻斷蛋白質合成，對細菌、酵母、高等植物以及哺乳動物細胞均具有氨基糖苷類毒性，用於真核細胞從轉座子
Tn5
和
Tn601
穩定轉染新黴素
（neo）
抗性基因的選擇和維持，經常用於基因轉移、基因敲除、抗性篩選以及轉基因動物等方面。
G418 solution
經過濾除菌，一般工作濃度為
50
～
1000ug/ml
不等，不同型別的細胞需要根據實驗確定最佳濃度。在具有相對穩定基因組的細胞
（
如
CHO
細胞
）
中，一旦篩選出穩定細胞株後，無需加入
G418
即可繼續培養。
產品組成
：
操作步驟：
1。
由於每種細胞對
G418
的敏感性不同，而且不同批次
G418
的活性也不盡相同，所以在篩選之前，需要確定
G418
的最佳篩選濃度，一般在
50
～
1000μg/ml
範圍內進行篩選。
2。
將細胞製備成細胞懸液，並稀釋到
1000
個
/ml
。
3。
加入不同量的
G418 solution （20mg/ml）
，選擇在
10~14
天內使細胞全部死亡的最低
G418
濃度來進行下一步的篩選試驗。
注意事項：
1。
儘量減少反覆凍融的次數，以免失效。
2。
基因轉染到細胞內後，需要一段時間才能表達出蛋白質，所以篩選不宜太早。
3。
篩選也不宜太遲，一般要在轉染
24h
之後才開始加
G418
篩選。因為轉染了外源基因的細胞代謝負荷較大，增值較慢，時間長了就會被沒有外源基因轉入的細胞所淹沒，最終導致篩選不出陽性克隆。
4。
隨著細胞代謝，
G418
的濃度和活性都會下降，應每
3~5
天更換一次含有
G418
的篩選液，這時藥物濃度可以降至
200μg/ml
。
5。
加藥篩選約
5
～
7
天左右，細胞會大量死亡，為了減少死亡細胞對陽性克隆的不利影響以及增加陽性克隆的獲得率，可以應用套環法或刮除法結合有限稀釋法來篩選陽性克隆。加藥後，在高倍鏡下
，
刮除陰性克隆，消化陽性克隆後繼續篩選培養。或者用套環套住陽性克隆，在套環內加胰蛋白酶消化，把消化液吸到另外一個新的孔中培養，最後再用有限稀釋法把陽性克隆在
96
孔板中篩選。
6。
一般經過
4
周左右的篩選，得到的陽性克隆都比較穩定。但是外源基因如果沒有整合到基因組中的話，目的基因還是很容易丟失的，再次篩選往往是必不可少的，經過
2
次以上的篩選之後才能找到遺傳穩定的細胞克隆。
7。
注意無菌操作，儘量避免汙染。
8。
為了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。
有效期：
6
個月有效
。
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